미생물학 Chapter 9 [멸균 및 소독]

III. 호흡효소에 관한 시험

 1. Oxidase test

 

 1) Neisseria에 이용되는 oxidase test

 1% p-aminodimethylaniline 염산염 수용액을 집락에 적하하면 양성인 때는 분홍색에서 적자색이 되고 다시 흑색으로 변화한다. 시약은 곧 변질되어 못쓰게 되므로 사용 직전에 만들어 사용하지만 ascorbic acid를 첨가하여 냉장고에 보관하면 오래 쓸 수 있다.

 

 2) 그람 음성 간균, 그 밖의 균에 쓰이는 oxidase test

 Kovacs법, Ewing-Johnson법, Garby-Hadley법이 있다. Kovacs법은 여지에 1% tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride 수용액을 집락에 적하하면 양성인 때는 10초 이내에 자색을 띤다.

Ewing-Johnson법은 1% dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride 수용액을 집락에 적하하면 양성인 때는 10~30초 후 청색을 나타낸다.

 

2. Catalase test

 Catalase란 과산화수소를 물과 산소로 분해하는 효소이다. 시험관법과 슬라이드법이 있다. 3% 과산화수소에 고형배지상의 신선 배양균을 섞어서 양성이면 기포가 발생한다. 임상적으로는 Staphylococcus와 Streptococcus 감별에 이용한다.

 

■멸균과 소독■

 미생물의 살균에 관한 개념은 두 가지로 나눈다.

 (1) 멸균 : 모든 미생물을 살균시키거나 제거시는 것. 화염멸균, 건열멸균, 고압증기멸균, 여과멸균, gas 멸균 등이 있다.

 (2) 소독 : 병원균은 사멸시키지만 비병원균은 아직 살아남아 있을 가능성이 있는것. 화학약품(소독약), 자비소독, pasteurization 등이 있다. 또한 음식물, 약품 등이 부패되지 않도록 부패균을 죽이든지 증식을 억제 시키는 일을 방부라고 한다.

 

I. 멸균법

 1. 가열멸균

 Gas burner, alcohol lamp의 불꽃으로 백금이 등을 멸균한다. 또한 미생물에 의한 오염물은 소각함으로써 완전히 멸균이 된다. 실험실내에서 백금이를 화염 멸균할 때 다량의 균체가 묻어 있으면 균이 튀어 오염의 위험이 있으므로 주의해야한다. 특히 결핵균, 아포가 있는 균, 병원성 진균인 때는 일단 백금이를 cresol water에 담구었다가 화염멸균을 한다. 임상에서는 편리한 전기식 백금이 멸균기를 사용하고 있다.

 건열멸균은 건열멸균기로 160℃, 30분~1시간, 또는 180℃로 내부온도를 상승시켰다가 heater를 끄고 그대로 방치시켜 자연히 냉각되는 것을 기다린다. 모든 미생물은 멸균된다. 지금은 임상에서 잘쓰이지 않는 기구지만 유리기구, flask 등을 멸균하는 데 이용된다.

 고압증기멸균은 Autoclave를 써서 2기압 121℃, 15~20분간 가열증기 멸균한다. 미생물은 아포를 포함하여 모두 멸균되는데 일부 virus는 사멸되지 않는다. 더욱이 autoclave 내에 공기가 남아 수증기가 충만되지 않고 121℃에 도달되지 않으면 완전한 멸균효과를 기대할 수 없다. 배지, 각종 검체, 의류 등의 멸균에 쓰인다. 대부분의 병원들이 고압증기멸균을 사용하고 있다.

 평압증기멸균은 Koch 솥이 쓰인다. 100℃의 평압증기로 15~30분간 멸균한다. 일반적 병원세균은 사멸되지만 아포, virus는 사멸되지 않는다. 현재는 사용 하지 않는다.

 간헐멸균은 100℃, 30분간의 멸균을 하루 한 번씩 3일간 연속하는 방법이다. 보통 한 번의 멸균으로는 사멸되지 않는 아포를 다음 날까지 발아시켜 저항이 약한 발육형으로 키운 다음 살균시키는 방법이다. 또한 혈청배지, 오가와 배지 등을 만들 때 85℃, 30분간의 가온을 3일간 시행하여 멸균한다.

 

 2. 여과멸균

 가열하면 변질되는 요소나 당과 같은 용액의 멸균에 이용된다. 세균여과기에는 Seitz filter, Chamberland filter, Berkefeld filter, Membrane filter 등이 쓰인다. Vrius는 여과기를 통과한다. Filter가 막히거나 흡착으로 성분의 활성이 저하되는 수가 있다. 사용 도중에 오염이 되어 실패하는 일이 있어 주의가 필요하다.

 특수한 공기 filter를 사용한 air conditioner에 의한 무균실은 골수 이식환자, 백혈병, 그 밖의 감염 저항성이 낮은 환자의 수용실로서 이용된다. 

 

 3. 가스 멸균

 가열하면 변성되는 것, 가령 고무제품, 플라스틱 제품, 일회용 제품, 내시경, 수술재료 등의 멸균에 쓰인다.

 

 4. 자외선 멸균

 자외선은 260~280nm 부근에서 가장 살균력이 강하다. 자외선 살균 등으로 외과 수술실, 무균실, 등에 사용한다. 미생물실 생물학적 안전상자(Clean bench) 에도 자외선 멸균을 사용한다.

 

 5. 방사선 멸균

 α,β,γ선 및 X선은 살균력이 있다. Cobalt 60의 γ선으로 의료용 재료 등의 멸균을 한다. 투과력이 극히 강하여 내부의 균도 충분히 살균할 수가 있으나 방사선이 생체에 미치는 영향에 주의해야한다.

 

6. 초음파 멸균

 초음파를 세균 부유액에 작용시키면 균체가 파괴되어 사멸한다. 현재로서는 멸균법으로 이용되기 보다 수술 전의 수세, 수술기구, 연구기재의 세정, 균체 파괴에 의한 내용물 추출 등에 쓰인다.